細(xì)菌內(nèi)毒素定量光度測定法操作規(guī)程與有效性評估指南

一、概述

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（定量檢測）之光度測定法是一種利用光譜分析技術(shù)來測定樣品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的方法。此方法依賴于鱟試劑（一種從鱟的血液中提取的生物試劑，對細(xì)菌內(nèi)毒素高度敏感）與內(nèi)毒素反應(yīng)產(chǎn)生的濁度變化，通過比色法量化內(nèi)毒素水平。

二、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

材料準(zhǔn)備：用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配成溶液，并制成至少3個不同濃度的稀釋液，稀釋度不得大于10，濃度不得低于所用鱟試劑的標(biāo)示檢測限。

試驗(yàn)設(shè)置：每一稀釋步驟的混勻時間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時設(shè)置2支陰性對照。

數(shù)據(jù)分析：當(dāng)陰性對照在設(shè)定的時間內(nèi)不發(fā)生反應(yīng)時，對全部數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(r)的絕對值應(yīng)大于或等于0.980，否則需重新試驗(yàn)。

三、光度測定法操作步驟

溶液準(zhǔn)備：選擇標(biāo)準(zhǔn)線中點(diǎn)或一個靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度，制備溶液A、B、C和D。

加樣與保溫：參照所用儀器和試劑的有關(guān)說明，確定供試品和鱟試劑的加樣量、比例以及保溫時間。每種溶液至少做2個平行管。

檢測與計算：使用溶液C生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算溶液A的每一平行管的內(nèi)毒素濃度。通過溶液B和A的濃度差計算內(nèi)毒素的回收率，確保其在50%-200%的范圍內(nèi)。

四、試驗(yàn)有效性判定

標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性：系列溶液C的結(jié)果需符合標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)要求。

回收率：用溶液B中的內(nèi)毒素濃度減去溶液A中的內(nèi)毒素濃度后，計算出的內(nèi)毒素的回收率應(yīng)在50%-200%的范圍內(nèi)。

陰性對照：溶液D（陰性對照）在規(guī)定的反應(yīng)時間內(nèi)未檢測出內(nèi)毒素。

供試品判定：若供試品溶液所在平行管的平均內(nèi)毒素濃度乘以稀釋倍數(shù)和濃度后，小于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，則判供試品符合規(guī)定；若大于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，則判供試品不符合規(guī)定。

五、注意事項(xiàng)

嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，確保試驗(yàn)環(huán)境的潔凈和穩(wěn)定。

使用經(jīng)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)驗(yàn)證合格的無熱原器具，以減少干擾和誤差。

遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素旋渦震蕩次數(shù)的建議，確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

定期對儀器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)，以保證其性能的穩(wěn)定和準(zhǔn)確。

這種方法是藥品、醫(yī)療器械及生物制品安全性評估中重要的一部分，確保產(chǎn)品無細(xì)菌內(nèi)毒素污染，保障患者安全。