細(xì)菌內(nèi)毒素中臨床樣品測定值的影響因素

1、對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素活性影響

我們知道，樣品中鐵、鋁等離子能夠引起細(xì)菌內(nèi)毒素活性的降低，當(dāng)我們?cè)趦?nèi)毒素溶液中只需加入0. 04mM的鐵，0. 02mM的鋁，就可引起內(nèi)毒素活性下降30%左右，另外其他金屬離子如Mg2+、Ga2+等也有這種影響。雖然這種情況對(duì)于臨床樣品測定影響不大，但是我們?cè)谑褂脙?nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過程及測定時(shí)要引起注意。

2、測定方法的影響

前面我們已經(jīng)介紹，在眾多鱟試驗(yàn)法中，作為臨床體外診斷試劑許可的常用內(nèi)毒素測定法，主要是微量定量的比濁時(shí)間分析法和合成基質(zhì)法兩種。

1.比濁時(shí)間分析法

系根據(jù)LAL/TAL試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)所形成的濁度變化作為指標(biāo)的一種手段，因此它很容易受到樣品中的濁度影響。但是我們知道，測定中沒有絕對(duì)的濁度值，由于是以變化率作為指標(biāo)，因此在有濁度的樣品中進(jìn)行測定時(shí)，反應(yīng)過程中不受沒有非特異性濁度變化的情況是不可能的，另外，使用表面活性劑的稀釋加熱法，可使測定過程中的非特異濁度變化減輕。今后，人們期待著開發(fā)能夠避免非特異濁度變化影響的前處理方法和測定方法。

2.合成基質(zhì)法

是以LAL/TAL試劑凝固酶肽合成基質(zhì)水解作為指標(biāo)和分析方法，分為終點(diǎn)比色法和動(dòng)態(tài)比色法。在終點(diǎn)比色法中，由于測定分離PNA的對(duì)銷基苯胺的黃色(405nm)或偶氮化后的紅色(545nm)，因此要注意膽紅素等黃色物質(zhì)共存的影響以及各種磺胺類制備對(duì)紅色的假陽性影響。

3.血漿成分的影響

血漿中的抗凝血酶Ⅲ，a2纖維蛋白溶酶抑制劑等對(duì)LAL試劑中的凝固酶存在干擾作用，為了去除這些影響，人們開發(fā)出了各種前處理方法。另外血中還存在著對(duì)測定產(chǎn)生影響的各種各樣內(nèi)毒素結(jié)合物質(zhì)，如：甘油三酯核糖蛋白，高密度核糖蛋白(HDL)及低密度核糖蛋白(LDL)LBP、BPI等，這些物質(zhì)也會(huì)干擾鱟試驗(yàn)測定。這些物質(zhì)的影響可以考慮為對(duì)內(nèi)毒素活性干擾作用。這些物質(zhì)在反應(yīng)液中存在時(shí)，就有可能抑制內(nèi)毒素的活性，但是在使用酸處理或加熱處理測定血中的內(nèi)毒素時(shí)，這些蛋白性的內(nèi)毒素結(jié)合物質(zhì)變性的可能性很強(qiáng)。因此，我們?cè)跍y定時(shí)要引起注意。

4.我國發(fā)展現(xiàn)狀

到目前為止，國外對(duì)于血中的微量細(xì)菌內(nèi)毒素測定一般均采用定量的動(dòng)態(tài)比濁法和比色法，用于臨床的診斷及研究也十分普遍，而且均具有專門的試劑盒。國內(nèi)由于在定量方法上的研究起步較晚，加之定量比色試劑也剛剛開發(fā)出來，因此在臨床上的研究還剛剛開始。雖然有一些單位一直進(jìn)行這方面的檢驗(yàn)工作，但幾乎都是使用半定量凝膠法，加之血液前處理方法的使用也各不相同，因此各個(gè)單位之間數(shù)據(jù)參差不齊，無法比較。故建立標(biāo)準(zhǔn)化前處理方法以及測定方法才能準(zhǔn)確檢測血中內(nèi)毒素，為臨床的早期診斷提供理論依據(jù)。

相信在不遠(yuǎn)的將來，內(nèi)毒素的含量測定將在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域得到快速發(fā)展和應(yīng)用。