細(xì)菌內(nèi)毒素（脂多糖）的提取之PCP法、高壓超聲處理法及DMSO法的介紹

一、苯酚╱氯仿╱石油醚法（PCP）

LPS分子鑲嵌于胞壁的外膜中，用某些化學(xué)試劑將胞壁裂解（如酚）后，LPS分子從破潰的胞壁中游離出來。由于LPS是一種兩性分子，故它們?cè)诓煌軇┲械娜芙舛龋?取決于該分子上的親水/疏水性基團(tuán)的多少。S-LPS有完整的親水性О特異性側(cè)鏈，所以S型LPS屬親水性分子。而R型LPS，缺乏O特異性側(cè)鏈，含有完整或不完整的核心多糖和完整的類脂A，親水度不大，而易溶于有機(jī)溶劑中，故而R-LPS用酚水法提取時(shí)所得的產(chǎn)量極低。

PCP法是以90%苯酚、氯仿及石油醚（40～60℃）以2：5：8所組成的單相混合提取液，這一提取方法只能將LPS及與之緊密結(jié)合的透道蛋白（Porin）提取出來，而其它成分則排除在提取液外。PCP法的水沉淀步驟僅能使LPS發(fā)生沉淀，而透道蛋白仍溶于苯酚中，故而PCP法所提取的LPS是一種較為純化的制劑。

PCP法對(duì)制取R型細(xì)胞的LPS產(chǎn)量十分滿意，且無核酸污染，蛋白質(zhì)含量也僅在0.1～1 %間，該法溫和，在室溫5～20℃即可完成，制取周期較短，適用于從R_a至R_e的細(xì)菌，可成功地提取R-LPS，產(chǎn)量也相當(dāng)高。故PCP法是研究R-LPS的有用方法。應(yīng)必須注意的是在PCP法中，每一步操作均不應(yīng)使用鹽類，如MgCl₂、CaCl₂，否則會(huì)嚴(yán)重影響產(chǎn)量。

二、高壓超聲處理法

以某些物理方法（如超聲波）處理菌體細(xì)胞，使其*破裂，可增加繼后提取方法的*性，從而可使LPS的產(chǎn)率增加。Richard1983研制了一種既可提取光滑型又可提取粗糙型LPS的新方法。該方法采用了高壓處理（15000Ib/in²）細(xì)菌的方法，粉碎菌細(xì)胞，繼又用超聲波處理，促進(jìn)碎片*裂解，再以DNa s e，RNa s e處理，消化核酸。再加入蛋白酶去消化蛋白質(zhì)，離心12000xg，濃縮干燥。如此制得的LPS，產(chǎn)量為菌體的51～81%（按測(cè)脂肪酸、庚糖和KDO值），蛋白質(zhì)為0.1%、核酸1 %、脂類2～5%，純度較高，產(chǎn)量比酚水法高7倍，比PCP法高2倍。

所得LPS經(jīng)各種免疫化學(xué)分析，均提示用此方法提取的LPS其抗原結(jié)構(gòu)完整。其不足之處是堿性條件上的加熱，以前認(rèn)為這一處理在于除掉蛋白質(zhì)，特別是對(duì)于有些細(xì)菌（如綠膿桿菌）有用，但對(duì)別的細(xì)菌恐屬多余。應(yīng)當(dāng)指出的一點(diǎn)是，堿性加熱條件使類脂體A上的脂肪酸酯降解。另外一個(gè)不足之處是，此方法較為復(fù)雜，不易被一般實(shí)驗(yàn)室采用。

三、DMSO法

Adams介紹了一種較為簡(jiǎn)單的LPS提取方法。該法應(yīng)用二甲亞砜（Dimethyl Sulfoxide，DMSO）作為主要提取試劑。以胞壁原料提制LPS。主要步驟為將預(yù)先制取的干燥胞壁以60℃DMSO提取水洗，酸化丙酮處理，冷凍干燥。DMSO法提取的LPS產(chǎn)量是酚水法的10倍，但蛋白質(zhì)含量很高（45%） 。